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植物茄呢醇磷酸酶2操作步驟竟然如此簡(jiǎn)單

點(diǎn)擊次數(shù):1108 更新時(shí)間:2018-10-27

植物茄呢醇磷酸酶2方法的基本原理是:
①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),把受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)和
酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi),zui后結(jié)合在固相載體上
的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的
深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可地地放大反應(yīng)效果,從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。因此,ELISA檢測(cè)是一項(xiàng)定位、定性和定量
(敏感度可達(dá)每毫升ng~pg水平)的綜合技術(shù)。
植物茄呢醇磷酸酶2操作步驟:
1.編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50µl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40µl,然后再加待測(cè)樣品10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部
,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
10.終止:每孔加終止液50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
植物茄呢醇磷酸酶2檢測(cè)范圍:
人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬、其它動(dòng)物細(xì)胞因子、植物細(xì)胞因子、骨代謝、細(xì)胞凋亡、激素內(nèi)分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體、血
栓與止血、腫瘤、自身抗體科研Elisa檢測(cè)試劑盒。
ELISA試劑盒檢測(cè)類型:雙抗體夾心法測(cè)抗原、雙抗原夾心法測(cè)抗體、間接法測(cè)抗體、競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體、競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原、捕獲包被法測(cè)抗體、ABS-ELISA法。  上一篇 葉綠體Elisa試劑盒樣本采集和準(zhǔn)備 下一篇 植物茄呢醇磷酸酶2實(shí)驗(yàn)三要素

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