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大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1復(fù)蘇操作流程

點(diǎn)擊次數(shù):741 更新時(shí)間:2021-07-13

大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1復(fù)蘇操作流程:

1. 準(zhǔn)備工作,開水浴鍋,預(yù)熱試劑,超凈工作臺(tái)紫外照射 30min,找到對(duì)應(yīng)細(xì)胞在液氮罐中的位置
2. 紫外照射后風(fēng)機(jī)吹 10min 后,酒精擦拭臺(tái)面,放入試劑和離心管,取 15ml 離心管,加入 9ml 培養(yǎng)液
3. 在液氮罐中取出細(xì)胞,先擰松放液氮,再擰緊,將凍存管放入 PE 手套中,然后水浴融化后取出,1-2min
4. 將凍存管噴酒精后放入超凈臺(tái)內(nèi),擦干管壁,用 1ml 頭將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到已加培養(yǎng)液的離心管中
5. 800-1000rpm 離心 5min,注意配平
6. 將離心好的細(xì)胞棄上清,加入 5ml *培養(yǎng)基重懸,用移液管吹打 8-10 次, 避免產(chǎn)生氣泡,將細(xì)胞懸液接種到 10cm 培養(yǎng)皿中,補(bǔ)加 5ml 培養(yǎng)液
7. 混勻,十字法或者 8 字法
8. 將混好的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過1小時(shí),以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。

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