小鼠鐵蛋白(Ferritin)ELISA試劑盒?標本的采集與保存
小鼠鐵蛋白(Ferritin)ELISA試劑盒標本的采集與保存:
1. 血清：
將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：
用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20oC或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿：
1） 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；
2） 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進行充分研磨，該過程需在冰上進行（有條件實驗室可選用機器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融 進一步處理（超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復(fù)凍融法可重復(fù)2次）。
3） 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘，留取上清即可檢測。
4. 細胞裂解液：
1）貼壁細胞需要先用yi酶消化，離心收集細胞（懸浮細胞可直接離心收集）；
2）將收集到的細胞用冷PBS 洗3 次；
3）物理方法裂解細胞（可先超聲破碎細胞，再反復(fù)凍融）：
i 超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞，用一定功率的超聲波處理細胞懸液，使細胞急劇震蕩破裂。
ii 反復(fù)凍融：將待破碎的細胞在-20 oC 以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3 次，使細胞溶脹破碎。
4）將標本于2-8 oC 1500×g 離心10 分鐘，收集上清備用。
5. 細胞培養(yǎng)上清或其它生物標本：
請 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注意：
1. 以上標本均需密封保存，4oC保存應(yīng)小于1周，-20oC不應(yīng)超過1個月，-80oC不應(yīng)超過2個月。
2. 標本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解。
3. 實驗前紅細胞裂解液必須用標準品稀釋液稀釋。
